Аннотация: В данной работе проведена оценка изменения микрофлоры кишечника и содержания цитокинов в копрофильтратах у 47 детей с экстремально низкой массой тела при рождении (ЭНМТ), имеющих гестационный возраст 22-28 недель в динамике постнатального периода.
Ключевые слова: недоношенные дети, микрофлора, иммунитет.
Медицинские науки
УДК 616.345
Шамова Ксения Павловна
аспирант
ФГБУ «Уральский научно-исследовательский
институт охраны материнства и младенчества»
Министерства здравоохранения Российской Федерации,
г. Екатеринбург
Чистякова Гузель Нуховна
доктор медицинских наук, профессор
ФГБУ «Уральский научно-исследовательский
институт охраны материнства и младенчества»
Министерства здравоохранения Российской Федерации,
г. Екатеринбург
Ремизова Ирина Ивановна
кандидат биологических наук
ФГБУ «Уральский научно-исследовательский
институт охраны материнства и младенчества»
Министерства здравоохранения Российской Федерации,
г. Екатеринбург
Устьянцева Людмила Станиславовна
аспирант
ФГБУ «Уральский научно-исследовательский
институт охраны материнства и младенчества»
Министерства здравоохранения Российской Федерации,
г. Екатеринбург
Shamova K.P.
graduate student
The FGBI "Ural research Institute of maternity and infancy"
of the Ministry of health of the Russian Federation,
Ekaterinburg
Chistyakova G. N.
doctor of medical Sciences, Professor
The FGBI "Ural research Institute of maternity and infancy"
of the Ministry of health of the Russian Federation,
Ekaterinburg
Remizova I.I.
candidate of biological Sciences
The FGBI "Ural research Institute of maternity and infancy"
of the Ministry of health of the Russian Federation,
Ekaterinburg
Ustyantseva L.S.
graduate student
The FGBI "Ural research Institute of maternity and infancy"
of the Ministry of health of the Russian Federation,
Ekaterinburg
ХАРАКТЕР МИКРОБНОЙ КОЛОНИЗАЦИИ И ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ У ДЕТЕЙ С ЭКСТРЕМАЛЬНО НИЗКОЙ МАССОЙ ТЕЛА В ДИНАМИКЕ ПОСТНАТАЛЬНОГО ПЕРИОДА
Аннотация: В данной работе проведена оценка изменения микрофлоры кишечника и содержания цитокинов в копрофильтратах у 47 детей с экстремально низкой массой тела при рождении (ЭНМТ), имеющих гестационный возраст 22-28 недель в динамике постнатального периода.
Ключевые слова: недоношенные дети, микрофлора, иммунитет.
Annotation. In this paper we evaluated the changes of intestinal microflora and the content of cytokines in coprofiltrates in 47 children with extremely low birth weight (ELBW), with gestational age of 22-28 weeks.
Keywords: premature babies, microflora, immunity.
Введение. Антигенная нагрузка, создаваемая кишечной микробиотой, играет важную роль в созревании иммунной системы у новорожденных детей. Нормофлора обладает выраженными иммуногенными свойствами и способствует развитию лимфоидной ткани кишечника и местного иммунитета [4, с. 86-89]. Недоношенные дети с экстремально низкой массой тела при рождении имеют бедный видовой состав кишечной микробиоты. Данная категория пациентов нуждается в массивном проведении антибактериальной терапии и длительном периоде нахождения в условиях стационара, что оказывает негативное влияние на формирование кишечной микрофлоры [2, с. 25; 3, с. 29-33]. При нарушениях микроэкологии кишечника, дефиците бифидофлоры и лактобацилл, беспрепятственном бактериальном заселении кишечника условно-патогенной микрофлорой возникают условия для снижения иммунной резистентности организма и развития воспалительных процессов в кишечнике [4, с. 86-89]. Становление и функциональное развитие кишечной экосистемы новорожденного начинается с момента рождения и динамично меняется с возрастом [1, с. 20-24]. Работ, посвященных изучению формирования кишечного микробиоценоза у детей с ЭНМТ, в литературе встречается редко, поэтому данная проблема является весьма актуальной.
Цель исследования. Оценить изменение микрофлоры кишечника и содержание цитокинов в копрофильтратах у детей с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) в раннем, позднем неонатальном периоде и по достижению постконцептуального возраста 38-40 недель.
Материалы и методы. Проведено иммунологическое и бактериологическое обследование 47 детей с ЭНМТ, родившихся на 22-28 неделе гестации.
Иммунологическое обследование включало в себя оценку продукции про- и противовоспалительных цитокинов на локальном (копрофильтраты) уровне. Исследование копрофильтратов проводилось на 5-7 сутки, в 1 месяц жизни и в постконцептуальном возрасте 38-40 недель.
Содержание IFN-g, IL-4, IL-6 и IL-8 определяли с помощью коммерческих тест-систем «Вектор-Бест» (Россия).
Детекцию проводили на иммуноферментном анализаторе «Multiskan МСС/340» фирмы Labsystems (Финляндия).
Исследование микрофлоры кишечника проводили на 5-7 и 26-30 сутки жизни, а также в постконцептуальном возрасте 38-40 недель.
Микробиологическое исследование фекалий проводили по методике количественного посева Ю. М. Фельдман и соавт. Идентификацию выделенных культур проводили с помощью коммерческих биохимических тест-систем фирмы «LACHEMA» (Чехия). Определение чувствительности к антибиотикам клинически значимых штаммов микроорганизмов осуществляли диск-диффузионным методом согласно МУК 4.2.1890-04.
Cтатистическую обработку результатов иследований проводили с использованием пакетов прикладных программ Excel.
Результаты. В результате бактериологического исследования фекалий у детей с ЭНМТ выявлено, что к концу раннего неонатального периода у 37 детей (95,3%) не выделалась полостная кишечная микрофлора. Только у 4,7 % (10 детей) кишечник был колонизирован. При этом монокультура определялась у большинства новорожденных (90%). У одного ребенка (10%) выделялась микст-флора (Enterobacter cloacae 104 и Candida albicans 105 КОЕ/л). Коагулаза-отрицательные стафилококкоки (Staphylococcus epidermidis – 103 КОЕ/г) в монокультурах, выделены в 10% случаев, в 20% наблюдений в копрофильтратах определялся Staphylococcus haemolyticus 107 КОЕ/г. Грамотрицательные микроорганизмы: Klebsiella pneumoniae – 103-107 КОЕ/г, Enterobacter cloacae – 104 КОЕ/г, Escherichia coli 105 КОЕ/г в 50% случаев. Грибы рода Candida в 20% наблюдений. Оценивая вышеизложенное можно заключить, что микробный пейзаж кишечной микрофлоры у детей с ЭНМТ в возрасте 5-7 суток жизни был представлен в равном соотношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.
К возрасту 1 месяца число детей, у которых не наблюдался рост микрофлоры, сократилось в 1,6 раза (46,8%). Ассоциация микроорганизмов была обнаружена только у 1 ребенка (2,1%). В данном случае микст-флора была представлена: Candida crusei 105 КОЕ/г и Staphylococcus epidermidis 105 КОЕ/г. Грамотрицательные микрооганизмы (Klebsiella pneumoniae 104-107 КОЕ/г, Escherichia coli 104-107 КОЕ/г, Enterobacter cloacae 106 КОЕ/г, Pseudomonas spp. 104-106 КОЕ/г, Stenotrophomonas maltophilia 105 КОЕ/г) у детей с ЭНМТ выделялись в 25,5% случаев. Грамположительные микроорганизмы (Staphylococcus epidermidis 103-105 КОЕ/г, Enterococcus faecium 104 и 106 КОЕ/г) встречались с частотой 23,4%. У одного ребенка (1,2% случаев) высевалась Саndida albicans 104 КОЕ/г.
На момент достижения постконцептального возраста 38-40 недель, кишечная микрофлора не выявлена у 36,1% детей (17 новорожденных), смешанная – в 12,7% случаев (6 детей). Чаще всего в микст-флоре выделялись Staphylococcus epidermidis в титрах 103-104 КОЕ/г (66,6% случаев), Klebsiella pneumoniae 104-107 КОЕ/г (50%), Enterococcus faecium 104-107 КОЕ/г (50%). У одного ребенка (1,6%) выявлена ассоциация двух грамположительных микроорганизмов (Enterococcus faecium 105 КОЕ/г и Staphylococcus epidermidis 103 КОЕ/г). В большинстве случаев (40,6%) полостная кишечная микрофлора была представлена грамотрицательными микроорганизмы (Klebsiella pneumoniae 105-107 КОЕ/г, Pseudomonas spp. 104-106 КОЕ/г, Klebsiella oxytoca 107 КОЕ/г, Escherichia coli 104-107 КОЕ/г, Enterobacter cloaceae – 106 КОЕ/г, Enterobacter aerogenes 104-107 КОЕ/г). Грамположительные микроорганизмы выделялись в 10,6% случаев и в большинстве случаев были представлены видом Enterococcus faecium 103-107 КОЕ/г.
Частота выявления условно-патогенной микрофлоры в копрофильтратах у детей с ЭНМТ
Таблица 1
|
Микроорганизм |
Возрастной период |
|||||
|
5-7 сутки |
30-е сутки |
ПКВ 38-40 недель |
||||
|
Абс. |
% |
Абс. |
% |
Абс. |
% |
|
|
Enterobactеr spp. |
0 |
0 |
3 |
6,3 |
4 |
8,5 |
|
Klebsiella |
1 |
2,1 |
3 |
6,3 |
8 |
33,2 |
|
E. Сoli |
1 |
2,1 |
2 |
4,2 |
3 |
6,3 |
|
Pantoea spp. |
1 |
2,1 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
0 |
0 |
1 |
2,1 |
0 |
0 |
|
|
Pseudomonas spp. |
0 |
0 |
3 |
6,3 |
0 |
0 |
|
S. epidermidis |
1 |
2,1 |
6 |
12,7 |
1 |
2,1 |
|
S. haemolyticus |
1 |
2,1 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
E. faecium |
0 |
0 |
4 |
8,5 |
3 |
6,3 |
|
Lactobacillus spp. |
0 |
0 |
1 |
2,1 |
0 |
0 |
|
Грибы рода Саndida |
2 |
4,2 |
1 |
2,1 |
0 |
0 |
Исследования цитокинового статуса в кишечнике показали, что в возрасте 5-7 суток жизни у 14,8% детей в копрофильтратах был обнаружен IFN-γ. В конце позднего неонатального периода IFN-γ стал определяться чаще (в 19,1% случаев), а к возрасту доношенного ребенка, снижаться (10,6%). Выявление IL-4, напротив, в постконцептуальном возрасте 38-40 недель наблюдось в 1,7 раза чаще, чем в возрасте 30 суток жизни. Цитокины IL-6 и IL-8 были обнаружены в поздний неонатальный период в 6,3% и 2,1 % случаев, а к возрасту доношенного ребенка данные цитокины определялись с одинаковой частотой (10,6%).
Заключение. Таким образом, у большинства детей с ЭНМТ на 5-7 сутки жизни, кишечник стерилен. Условно-патогенная микрофлора выявляется в единичных случаях. К завершению позднего неонатально периода у большинства детей кишечник колонизирован. Отмечается увеличение числа микробных ассоциаций, расширяется видовой состав микроорганизмов, грамотрицательные и грамположительные микроорганизмы присутствуют в кишечнике в равной степени. К моменту достижения возраста доношенного ребенка число детей с выделенной микрофлорой увеличивается, наблюдается смена микробного пейзажа, кокковая микрофлора кишечника вытесняется условно-патогенными микроорганизмами. В свою очередь, расширение видового спектра микроорганизмов и увеличение степени заселенности кишечника микрофлорой у недоношенных детей с ЭНМТ в конце позднего неонатального, а затем в постконцептуальном возрасте 38-40 недель коррелирует с повышением частоты обнаружения провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в копрофильтратах, что свидетельствует о формировании иммунного ответа на локальном уровне.
Литература:
